老师：各位同学大家好，今天我们来学习生物选修三专题。一、基因工程的第二节基因工程的基本操作程序。四、前面我们已经学习了目的基因的获取、基因表达载体的构建，将目的基因导入受体细胞。今天我们来学习目的基因的检测与鉴定。本节课的学习目标与任务是，一、说出目的基因的检测与鉴定方法。阐述分子碳针的工作原理。我们希望目的基因能在受体当中稳定的维持和表达，使受体获得新的遗传特性。由于基因控制生物的性状，所以我们检测的时候不仅仅要检测目的基因是否导入了受体细胞，我们还需要检测基因的转录和翻译是否正常，以及转基后的个体是否具有了新的遗传特性。因此我们要从4个水平进行检测与鉴定，DNA水平、rn水平、蛋白质水平以及个体水平。
老师：首先我们要检测转基生物的DNA上是否插入了目的基因，也就是说DNA水平上的检测，那我们要检测的对象就是目的基因。我们可以用什么样的方法进行检测？我们利用金探针进行DNA分子杂交，金探针就是带有标记的目的基因片段，这个标记可以是放射性同位素标记，也可以是荧光分子的标记。
老师：大家观察下面这个图片，大致原理就是将样品DNA进行加热，使之形成单量的DNA，带有分子标记的DNA探针可与样品进行碱基互补。配对好，同学们可以暂停一下，记一下笔记。同学们可以观察下面的两张图片，思考DNA分子杂交技术的流程。首先将受体生物DNA提取出来，经过适当的煤切后走琼芷糖凝胶垫用，将不同大小的片段分离开，然后将凝胶上的DNA转移到硝酸纤维素膜上，用标记了放射性同位素的DNA片段作为探针，与硝酸纤维素膜上的DNA进行杂交。如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合的双脸区。在没有互补的碱基序列的位置，仍然是两条有理的单量。最后将x光底片压在硝酸纤维素膜上，在暗处使底片感光，将x光底片冲洗。如果在底片上出现了杂交带，则表明受体染色体DNA上确实有目的基因，那这就是DNA水平上的检测。这个检测方法我们叫做thousandblot。我们想要检测目的基因是否转录出MRA，同学们思考一下可以用什么样的方法。
老师：观察下面的流程图可知，检测的方法与检测DNA的方法大体相同，利用的是分子杂交，用探针和转基生物的MRA进行杂交。如果出现杂交带，则表明目的基因转录出了MRA。这种检测方法我们叫做northblot，只不过它第一步是要从受体生物中提取的是m，r，a，而不是DNA。杂交带的显现也与thousandblot相同。
老师：接下来我们要检测目的基因是否翻译成蛋白质。检测的方法与上述方法有所不同，我们需要从转基因生物中提取出蛋白质作为检测的对象，利用的是抗原抗体杂交的原理进行讲检测。具体流程是，第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质，然后将这种蛋白质作为抗原注射给动物进行免疫，使其产生相应的抗体并提取出来，称为依抗。
老师：